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非洲猪瘟的研究进展
作者:常华1,花群义2*,段纲1,项…    论文来源:中国畜牧兽医杂志    点击数:1658    更新时间:2008/1/12

常华1,花群义2*,段纲1,项勋1,曾昭文1

1.云南农业大学动物科技学院,昆明  650201;2.云南省出入境检验检疫局,昆明  650228 )

 

摘要: 非洲猪瘟是猪的一种急性、高度接触传染性疾病.其感染高, 多种传播途径,死亡率可高达100%,现还无有效的疫苗及治疗措施。非洲猪瘟在临床上与猪瘟相似,虽这两种疾病的病原体完全不同,但在诊断时及易误诊,为了进一步了解该病,在本文中综述了该病毒的病原、流行病学、临床症状、鉴别诊断及我国现状,从而为诊断该病提供了依据。

关键词: 非洲猪瘟  病原 流行病学 临床症状 鉴别诊断

 

 

 

   非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪病毒(ASFV)引起的猪的一种急性、热性、高度接触传染性疾病。其特征为病程短、病死率高、临床症状和病理变化均类似于急性猪瘟,表现高热、皮肤充血、流产、水肿及脏器出血[1]。我国规定为动物一类疾病,并被世界动物组织〔OIE〕列为A类疫病,受到世界各国的高度重视[2]。但由于还没有研制出一种有效的疫苗来控制本病的流行,唯一的办法是根据诊断结果对带毒猪进行彻底捕杀,隔离受威胁的猪群。我国是世界养猪第一大国,目前虽尚无ASF,但该病一旦传入中国,则后果不堪设想,本文对该病作一综述,为准确诊断、及时采取预防措施提供依据。

1 病原

1.1 分类  非洲猪瘟在国际病毒分类委员会第四次报告中归于虹彩病毒科,在该委员会第五次报告中将其附在痘病毒科之下,置于该科的脊椎动物痘病毒亚科及昆虫痘病毒亚科之外。但DNA序列分析表明,ASF病毒具有介于痘病毒和虹彩病毒之间的特征,ASFV的这一特性表明它不属于国际病毒分类委员会所核定的任何一科,是个新科,1995年第9次国际病毒分类委员第六次报告,将非洲猪瘟病毒列入“类非洲猪瘟病毒属”,非洲猪瘟是唯一已知的代表种[3]

1.2 形态特征  ASFV是一种直径为200nm的正二十面体病毒,病毒含有直径70~100nmDNA核心,外周是直径172~191nm二十面体的衣壳和含类脂的囊膜。衣壳呈二十面体对称,对应有l892~2172个壳粒,中心有一孔,呈六棱镜状,壳粒间的距离为7.4~8.lnm。ASFV基因组为末端共价闭合的单分子线状双链DNA,大小170~190kb(随毒株的不同而有差异),末端交互连接,有末端倒置重复序列。基因组可以编码150~200种蛋白质,编码这些蛋白质的许多基因已被克隆和表达[4]

1.3 理化学特性  ASFV 对热的抵抗力不高,55℃30分钟或60℃10分钟可以使其灭活。在有血清存在时,稳定性明显增高。混于25%血清中的ASFV,于37℃的半活存期为24小时;但如没有血清,半活存期只有8小时。猪血液中的ASFV在5℃保存时,活存18个月。ASFV也可在腐败的血清和分泌物中长期保存。在冰冻肉尸内可以活存15周,骨髓中达6个月。1%福尔马林需6天才能致死。2%氢氧化钠于24小时内使其灭活。ASFV对乙醚及氯仿等脂溶剂敏感。在0.5%石炭酸和50%的甘油混合液中,于室温下可保存536d.最有效的消毒药是10%苯及苯酚[5] 

1.4  增殖   病毒通过受体介导的吞饮作用进入细胞,病毒核心含有mRNA早期合成和加工所需的酶,早期mRNA的合成和加工在病毒侵入后于胞浆内开始。转录产物3端含有polyA尾,5端有“帽”结构。病毒基因组编码mRNA转录和DNA复制的多种酶。病毒复制在感染后8小时达到高峰,这期间在细胞内出现可能是复制中间体的连结体DNA。DNA的复制可能以一种自身引导的机制进行,病毒通过破坏细胞或胞浆膜出芽释放[3]

1.5 培养特性  病毒能在鸡胚卵黄囊内生长,某些毒株,尤其是兔体适应株,可在6-7天内致死鸡胚;病毒能在猪的单核细胞、骨髓细胞和白细胞内生长,也能在牛肾细胞、BHK-21、MS细胞、CV细胞和Vero细胞中生长[6-7],病毒感染后8-10小时可出现红细胞吸附现象,吸附现象出现后24小时,细胞可出现CPE,此时,可在细胞浆中检测到嗜酸性包涵体[8]。但已有报道不产生红细胞吸附现象或CPE的毒株[9]

2  流行病学

2.1非洲猪瘟的流行情况

非洲猪瘟在1921年肯尼亚首次发现,死亡率可高达100%。1957年以前一直在非洲大陆流行,至60和70年代,本病蔓延至法国、意大利、撒丁岛和马耳他、古巴、巴西、多米尼加共和国和海地。1985年和1986年在比利时和荷兰也相继暴发。1989年本病存在于近赤道的非洲地区、葡萄牙、西班牙、撒丁岛、巴西和海地。截至目前已在非洲、欧洲和美洲等数十个国家流行,而且有不断蔓延趋势,2000年以来,先后发生ASF的国家有莫桑比克、贝宁、多哥、南非、肯尼亚、赞比亚、加纳、刚果、布基纳法索、尼日利亚和坦桑尼亚[10]。据OIE报道2003年8月25日,布基纳法索动物资源部报告,2003年7月1日孔皮恩加省孔皮恩加地区发生了1起非洲猪瘟。涉及400头猪,133头死亡,另有5头出现临床症状,诊断为非洲猪瘟[11]

2004年12月15日,姆万扎区Mwanza地区发生了1起非洲猪瘟,从临床症状、剖检和实验室检验进行诊断。涉及的5000头猪感染,483头发病,其中337头死亡,屠宰140头。兽医调查中心根据临床症状、剖检病理变化于2004年12月28日初步诊断为非洲猪瘟,经中央兽医实验室/动物疾病研究所进行竞争ELISA试验,南非Onderstepoort兽医研究所进行病毒分离,确诊为非洲猪瘟。传染源可能来自2003和2004年曾经发生非洲猪瘟的地区,也可能从邻国传入。坦桑尼亚采取的措施为淘汰、消毒、隔离,向布迪隆、刚果、卢旺达等邻国,以及FAO等国际组织或区域性组织通报疫情 [12]。2005年1月6日,奥卡汉贾区第27小区的1家农场在商品猪群中新发生了1起非洲猪瘟,60头猪感染, 5头发病,4头死亡,其余的56头被销毁。2006年3月20日南部非洲国家马拉维多个地方最近暴发非洲猪瘟,农业部动物健康局表示,马拉维最大的商业城市布兰太尔以及松巴等地都发现了非洲猪瘟 [13]

2.1 易感染动物  ASFV自然感染的动物包括家猪和野猪、疣猪、丛林猪和大森林猪。软蜱也能被该病毒感染[14-15]。病毒能在蜱中经卵和交配等传播。疣猪和家猪可以经感染蜱的叮咬而被感染[13]

2.2 感染途径  脾、虱和蚤是ASF病的虫媒和贮存宿主,病毒存在于它们的胆管内,在其唾液腺内或肠道内增殖。贮存宿主的唾液中病毒滴度较高,通过吸血可以向猪传递病毒。非洲猪瘟病毒主要经食物或呼吸道感染,病毒侵入血流并吸附于血细胞上而迅速散播至全身。将非洲猪瘟病毒滴人猪的鼻腔或口腔,很易使其发生感染。滴鼻感染时,病毒最先侵害咽喉部淋巴样组织,并迅速扩散至咽后淋巴结、扁桃体和颔淋巴结,由此进入淋巴流或血流而散布全身[16]

2.3 传播特点  猪群一旦感染病毒,发病率高,传染迅速死亡率高。此后就逐渐下降。康复猪带毒时间长,抗体对同型病毒猪的免疫性保持的时间较短。

3  临床症状

非洲猪瘟病毒的感染可分为急性、亚急性、慢性和隐性感染。只有处于急性感染期,体内才有大量的游离病毒粒子存在,对于慢性或隐性感染的动物,由于体内游离的病毒粒子很少,甚至以抗原抗体复合物的形式存在[17]

非洲猪瘟自然感染的潜伏期3—5d,也可延长到19d,个别长达28d。急性的临床特征为无食欲。体温升高40—40.9℃,稻留热3—5d。体温下降临死前呈深度昏迷状态,1—2d出现心跳加速,呼吸急促,皮肤出血,死亡率高。亚急性呈现鼻、耳、腹胁部位发绀,有出血斑。时有咳嗽、眼鼻有浆液性粘液的分泌物,后肢无力,出现短暂性的血小板、白细胞减少。慢性型特征为怀孕母猪流产、腹泻、呕吐、粪便有粘液、血液、时有呕吐、呼吸改变及低病死率[16]

4 剖检特征

急性、亚急性的病变特征为广泛性出血及淋巴组织破坏引起的出血性浆液性炎。主要损害在脾、淋巴结、心、肾,脾色泽变深脆性肿大及出血埂死。淋巴结出血切面呈大理石状。心包积聚大量浆液性液体,心内外膜有小点状、淤斑状出血[18]。肾脏皮质、肾盂的切面也有小点出血。急性病例可见整个消化道水肿出血,腹腔中有浆腔渗出。胆囊、膀胱粘膜针尖状出血,肝充血。胸腔内有胸水,胸膜上有出血点。肺水肿,脑膜脉络丛严重充血。

喉头、膀胱、肾皮质、心脏、肺和其他内脏器官表面都有明显的瘀斑。淋巴结肿大,并严重出血,整个淋巴结血肿。胸腔液、心包液和腹腔液增多,脾脏肿大2~3倍。中枢神经系统水肿,并有血管周围性出血[19]

5  鉴别诊断

5.1  非洲猪瘟与猪瘟均是由传染性极强的病毒引发的高度接触性、急性、热性败血型传染病。因其发病快传播迅速死亡率高,为能及时发现正确诊断有效控制疫情,准确鉴别、鉴定尤显重要。

非洲猪瘟绝大多数为急性病例,发热3—4d才出现临床症状,此后温度下降经l一2d即死亡。病猪无毛、少毛部位的皮肤出现紫斑区,界线分明,耳部发紫肿胀,四肢、腹胁见紫黑色出血斑点,中央呈黑色,四周干枯状。胸、腹腔、心包内有多量黄色、黄红色液体。肺小叶间、结肠的浆膜、粘膜、肠系膜、胆囊壁常见水肿呈胶样浸润[20] 。淋巴结、腹腔内有严重的出血病变,状如小的血疤。猪瘟在体温升高时就已出现明显的临床症状,直到死亡。仅见出血斑点,大理石状出血,未见小血瘤。显微镜检验时可采取淋巴组织切片染色检查,非洲猪瘟可见到淋巴细胞核破裂,而猪瘟则无此病特征[5]。还可以通过动物实验将病料接种于猪瘟免疫猪与猪瘟易感猪,如果俩组猪均不发病,则可排除猪瘟和非洲猪瘟;如果免疫猪不发病而易感猪发病,则为猪瘟;如果猪瘟免疫猪与易感猪均发病,则为非洲猪瘟。

5.2  实验室诊断

实验室诊断方法包括病毒分离、病毒抗原和基因组DNA的检测及抗体的检测。具体的实验室诊断方法有补体结合(CF)试验、琼脂扩散试验(AGID)、红细胞吸附(HAD)试验、对流免疫电泳(CIEP)、反向辐射免疫扩散试验、直接荧光抗体试验(FAT)、间接荧光抗体(IFA)试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹试验、聚合酶链反应(PCR)[6]

PCR可有效地用于检测血液或组织中的的病毒基因组,这项技术尤其适用于样品因腐败不适于做病毒分离和抗原检查时。在ASF呈地方性流行的地方,确诊最好用ELISA,结合另一种血清学试验方法如IFA或抗原检测方法如FAT[13]

80年代前国外建立了核酸杂交试验来检测病毒的核酸,不但大大提高了检测的灵敏度,而且还消除了散毒的后患之忧[21] 。多聚酶链式反应(PCR),是一种比核酸杂交更为快速、灵敏和简便的新方法,从而大大提高了检出率 [22]。目前发展起来实时荧光定量PCR检测技术,在2002年Scott M. Reidb, Geoffrey H.等以VP72为靶基因,建立了实时荧光定量PCR检测技术,它可将极微量的DNA模板在短时间内特异地放大百万倍以上,实验证明该方法比常规PCR更加可以快速检测出疑似非洲猪瘟的病例[23]

6 防治措施

迄今为止,尚未发现治疗ASF的有效药物,也无有效的预防疫苗。灭活疫苗无效,弱毒疫苗不安全,易导致慢性流行。在无ASF国家,一般采用综合防制措施,包括禁止从ASF国家进口活猪及其产品,对来自ASF国家的车船、飞机作无害化处理,严格封存来自ASF国家的车船、飞机食品仓中的猪肉制品等。在ASF流行国家,一旦发病,几乎都采取封锁、扑杀和销毁的措施。

猪群中若发现可疑病猪,应及时确报告并立即封锁现场,全部扑灭、销毁,彻底消灭病原体。牧场、工器具用2%-3%苛性钠溶液彻底消毒。暂停生猪饲养,经检测确诊为无病毒时才可恢复饲养,但进猪前仍需重复大消毒,方为安全。

7 展望

我国是无ASF国家,除采取严禁从ASF国家进口动物及其动物产品外,关于ASF的诊断和检疫技术方法的研究也更为重要。但在国内从事任何接触ASFV活毒都是危险的。因此建立无感染性的诊断方法适合我国十分必要。可通过构建非洲猪瘟病毒重组表达抗原建立ELISA方法,以及PCR诊断技术,为我国快速诊断ASFV做好技术储备。

参考文献

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[3]殷震,刘景华,动物病毒学[M],科学出版社,1997,1197-1206

[4] E.Vinucla ,非洲猪瘟---来自热带的威胁[J],国外兽医学-畜禽传染病,1989,8,9(3):1-3

[5]林荣泉,非洲猪瘟与猪瘟的鉴定及防控技术[J],肉类工业-信息报道,2001,237(3):25-2

[6]殷震. 动物病毒学[M].科学出版社,1985. 858-865

[7]赵德明,张中秋,沈建忠等译.猪病学[M].中国农业大学出版社,2000.89-105.

[8]曲连东,于康震. 非洲猪瘟研究进展[J]. 中国兽医科技,1998,28(11):42-43.

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[22] 张兹钧,金由辛,陈士友,用多聚酶链反应检测非洲猪瘟病毒的研究[J],动植物检疫,1999,29(2),3-7

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The Present Advancement on the Study of African Swine Fever Virus

Chang Hua1, Hua Qun-Yi2, Duan Gang1,Xiang Xun1, Zeng Zhao-Wen1

( 1 Collage of Science and Technology, Yunnan Agriculture University, Kunming, 650201  )

( 2 Yunnan Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau,  Kunming,  650228          )

 

Abstract: African Swine Virus (ASFV) caused by African Swine Fever virus is characterised by acute, high fever, the height contacts infective disease.ASF is dangerous because of its highly infectious nature, variety of means of spreading, high mortality rate ,almost 100% and the lack of specific treatment or vaccine. African swine fever is very similar to classical swine fever, but there are not the same pathogeny . These diseases can not be distinguished during the diagnosing, in order to further understand this disease, this text surveies etiologyepidemiologyclinical symptom differential diagnosis and current situation of our country, which offered the foundation for diagnosing this disease.

Keywords: African Swine Fever VirusEtiology EpidemiologyDifferential diagnosis

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